何首乌提取工艺设计

    白海波1 3

    , 王剑飞2

    , 龙 娟2

    (1.浙江中医学院 ,浙江 杭州310053 ;

    2.海南养生堂 药物研究中心 ,浙江 杭州310007)

    [摘要] 目的:分别以何首乌提取物2 ,3 ,4 ,52四羟基二苯乙烯222O2 β 2D2葡萄糖苷水平和提取物抗氧化能力为

    检测指标对何首乌进行提取工艺设计 ,并检验 2 ,3 ,4 ,52四羟基二苯乙烯222O2 β 2D2葡萄糖苷和抗氧化能力之间的相

    关性。方法:采用正交实验法以乙醇浓度(A) 、溶剂量( B) 、提取时间( C)和提取次数( D) 4 个因素 ,每个因素选取 3

    个水平进行实验。结果:因素 A , D对2 ,3 ,4 ,52四羟基二苯乙烯222O2 β 2D2葡萄糖苷的含量有显著影响 ,同样对何首

    乌的抗氧化能力影响也最为显著 ,经检验 2 ,3 ,4 ,52四羟基二苯乙烯222O2 β 2D2葡萄糖苷含量与何首乌的抗氧化能力

    之间呈显著线性相关( P < 0. 01) 。结论:以60 %乙醇 ,8倍量提取3次 ,每次1. 5 h为最佳提取工艺。

    [关键词] 何首乌; 2 ,3 ,4 ,52四羟基二苯乙烯222O2 β 2D2葡萄糖苷;提取工艺;抗氧化

    [中图分类号] R 283 [文献标识码] A [文章编号] 100125302 (2004) 0320219203

    何首乌为蓼科植物何首乌 Ploygoum multiforrum

    Thunb.的干燥块根 ,是乌须发、悦颜色、养精益血、抗

    衰老的要药。现代药理研究证明 ,何首乌及其所含

    的二苯乙烯苷类化合物具有抗衰老、提高免疫功能、防治动脉硬化及保肝等作用[1 ]。所以应将测定二苯

    乙烯苷类化合物的含量作为何首乌及其制剂的质控

    指标。本实验以2 ,3 ,4 ,52四羟基二苯乙烯222O2 β 2D2

    葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷) 为对照品 ,使用 HPLC

    方法对何首乌的提取工艺进行设计 ,并研究何首乌

    的抗氧化作用与2 ,3 ,4 ,52四羟基二苯乙烯222O2 β 2D2

    葡萄糖苷含量的相关性。

    1 实验材料与仪器

    HP1100高效液相色谱仪 ,DAD 检测器 ,HP1100

    工作站 ,Photochem抗氧化检测仪器。

    何首乌药材由华东医药公司提供 ,二苯乙烯苷

    对照品由中国药品生物制品检定所提供 ,乙腈为色

    谱纯 ,水为超纯水 ,Photochem所用试剂由德国J ENA

    公司提供。所有试剂如未注明规格 ,均为分析纯。

    2 实验方法与结果

    2. 1 高效液相色谱条件

    按参考文献[2 ]方法进行二苯乙烯苷测定。色

    [收稿日期] 2002207220

    [基金项目] 浙江省科技厅资助项目(021103553)

    [通讯作者] 3

    白海波,Tel : (0571) 86633587

    谱柱为 Spherigel C18柱(4. 6 mm× 150 mm , 5μm) ,流

    动相乙腈2水(17∶ 83) ,柱温30 ℃,流速 1 mL· min - 1

    ,检测波长320 nm ,进样量10μ L。

    2. 2 抗氧化能力测定

    何首乌提取物稀释后 ,根据文献[3 ]采用化学发

    光法 ,使用J ENA 公司试剂盒 ,在 PHOTOCHEM专用

    仪器上以维生素 C为对照品测定其抗氧化能力 ,结

    果以相当于 1μmol 维生素 C清除自由基能力的相

    对量表示。

    2. 3 正交实验设计及结果

    根据何首乌所含成分的理化性质与预试验结

    果 ,其影响因素主要有醇浓度、加醇量、提取次数等 ,故分别以二苯乙烯苷提取含量和抗氧化能力为指

    标 ,以L9 (34)进行设计 ,其因素水平见表 1 ,结果见

    表2、表4 ,方差分析见表3、表5。

    表1 正交试验因素水平表

    水 平

    因 素

    A

    乙醇浓度 %

    B

    溶剂量倍

    C

    提取时间 h

    D

    提取次数次

    1 50 8 0. 5 1

    2 70 10 1 2

    3 95 12 1. 5 3

    由表2 ,表 3 可见 ,以二苯乙烯苷含量为指标 ,则:用 70 %乙醇( A2) , 10 倍量( B2)提取 3 次( D3) ,每次1. 5 h( C3)为最佳提取条件。

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    第29卷第3期

    2004年3月 中 国 中 药 杂 志

    China Journal of Chinese Materia Medica

    Vol . 29 , Issue 3

    March , 2004

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.表2 何首乌药材以二苯乙烯苷

    为指标的正交试验结果

    试验号 二苯乙烯苷含量 mg· g - 1

    1 2

    1 1. 74 1. 40

    2 6. 92 6. 13

    3 12. 48 6. 38

    4 7. 39 6. 29

    5 8. 94 4. 37

    6 3. 71 5. 56

    7 2. 09 2. 58

    8 3. 47 4. 42

    9 0. 63 1. 51

    表3 影响何首乌药材二苯乙烯苷提取因素的方差分析

    来源 离均差平方和 自由度 方差 F值 显著性

    A 49. 10 2 24. 55 6. 76 P < 0. 05

    B 13. 98 2 6. 99 1. 93

    C 22. 55 2 11. 27 3. 10

    D 40. 17 2 20. 09 5. 53 P < 0. 05

    误差 32. 68 9 6. 85

    注:查方差分析表, F0. 01 (2 ,18) = 6. 01 , F0. 05 (2 ,18) = 3. 55

    表4 何首乌抗氧化能力正交试验结果

    试验号 抗氧化能力

    1 2

    1 1. 41 1. 44

    2 1. 67 1. 68

    3 1. 85 1. 82

    4 2. 07 2. 05

    5 1. 31 1. 33

    6 1. 23 1. 19

    7 1. 08 1. 06

    8 1. 04 1. 02

    9 0. 43 0. 59

    表5 影响何首乌药材抗氧化能力提取因素的方差分析

    来源 离均差平方和 自由度 方差 F值 显著性

    A 2. 10 2 1. 05 615. 31 P < 0. 01

    B 0. 33 2 0. 17 97. 84 P < 0. 01

    C 0. 15 2 0. 07 42. 37 P < 0. 01

    D 0. 94 2 0. 47 274. 91 P < 0. 01

    误差 0. 02 9 0. 002

    注:查方差分析表, F0. 01 (2 ,18) = 6. 01 , F0. 05 (2 ,18) = 3. 55

    由表4 ,表 5 可见 ,以抗氧化能力为指标 ,则:用

    50 %乙醇( A1) ,8 倍量( B2)提取 3 次( D3)每次 1 h

    ( C2)为最佳提取工艺 ......